关于活体成像技术应用一些技术参数的说明
关于活体成像一些技术的说明
1.关于拍摄曝光时间的问题
成像，对于生物发光来说，检测时间一般是1min~5min，如果信号特别弱，也可以延长到更长的时间，如果信号特别强，也可在1min以内，甚至1秒种以内。同样强的信号拍摄时间长，所捕捉的光子值多；拍摄时间短，所捕捉的光子值少。在实验中，需要事先摸索实验条件。LB 983 NC 100 由于采用背照射冷CCD，对于生物发光检测具有最好的灵敏度，检测生物发光成像能得心应手，对于小鼠检测深度不受限制，检测时间短，检测快速；LB 983 NC 320 由于采用前照射冷CCD，具有320万像素，检测荧光具有更高的分辨率，检测生物发光灵敏度不能得心应手，尤其是对于深部的生物发光和特别微弱的生物发光，可通过延长检测时间（有时可达10分钟）来获得补偿。如图1和图2是北京军事医学科学院2所4室采用我公司赠送的Huh-7-luc细胞进行成像的结果，成像时间仅为5秒和1秒。如果研究单位生物发光和荧光的实验都会应用，建议选用LB 983 NC 100型号的仪器。
实验图片发不上来
这是一组对比实验结果，图1和图2实验结果来源于同一样本小鼠，拍照参数只有曝光时间不同。图1采用5秒的曝光时间，图2采用的是1秒曝光时间，其它拍照参数完全一样。通过结果对比可以清晰看出同样强的信号拍摄时间长，所捕捉的光子值多；拍摄时间短，所捕捉的光子值少。
2.关于灵敏度与分辨率的问题
活体生物发光的优点是灵敏度高，可检测到几百个细胞，但是缺点是分辨率很差，在几毫米之间。具体表现形式就是在体内很小的肿瘤，在体表检测到的发光是很大的一片。这种分辨率的差别并不是由于CCD的分辨率造成的，而是由于光在体内的漫射造成的。生物发光检测为了提高灵敏度，还经常采用BIN值处理，把多个像素合并，这样就降低了CCD的像素和分辨率，成像图片可见方块样的图片。荧光成像由于信号比生物发光强很多，检测时间很短，所以可采用更高像素和分辨率的CCD，来达到更高的分辨率。
实验图片发不上来
图3和图4是LB 983 NC 320 的分辨率效果图片，在小鼠的明场照片，可见异常清晰的轮廓。明场与暗场的成像原理是一样的，只不过暗场的信号弱。明场的图片分辨率强，说明暗场的分辨率也强。
3.关于拍摄视野的问题
成像，对于生物发光来说，检测时镜头离样本越近，视野越小，样本发出光子被镜头捕获传到CCD的光信号越多。成像效果越好。
LB 983 NC 100配备暗室中配有高精密度数控马达传动升降装置，是世界上唯一配置了可自由升降CCD相机的光学仪器。可实现宽视野自动变焦（WV-AZ），可以自动调节相机本身的拍摄高度，相机移动的距离可从35到725mm，升降高度精确到0.01mm，具有粗、微双倍调节装置，相机本身具有根据不同高度实时自动对焦功能，已实现最佳成像效果。可以对样本进行多视野信号采集，视野面积35×35mm~260×260mm，视野递进精度达到1mm，满足多种生物样本检测需要。相机高度与拍摄视野呈线性关系。
生物发光靠的是CCD的灵敏度，靠的是暗箱的密闭性，但荧光方面LB 983 NC 100相比其他仪器就有了很多优势和特点，NightOWLⅡLB983系统率先采用了可调节的激发光能量设置，使能量可在0%~100%之间自动调节。在多编组样本分析时，需要确保在整个长时间多次成像中输出稳定的激发光。NightOWLⅡLB983系统配备的在线光能反馈控制装置使整个激发光路能量始终如一的稳定，对光源的实时监控，反馈补偿由于光源能量变动导致的激发光能量突增或缺失，以确保光源光效的稳定性。
NightOWLⅡLB983不仅在光路上有其特点，在实验过程中可以运用不同的荧光配件对于不同目标进行荧光成像实验。下面就是其部分配件及说明。
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