GST-pulldown实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和填料上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。
Pull down实验操作步骤具体为：表达纯化GST、polyHis或Biotin标记的诱饵蛋白，使用固定化亲和配体将诱饵蛋白与固相基质稳定结合，再将诱饵蛋白与待测细胞裂解液进行混合孵育，在这一过程中，诱饵蛋白与目标蛋白相互作用并结合在一起，通过清洗除去非特异性结合的杂蛋白，即可获得与诱饵蛋白相互作用的目标蛋白，再通过质谱分析对目标蛋白进行鉴定。
GST-pull down实验通常有两种应用:确定融合(或探针)蛋白与未知(或靶)蛋白间新的相互作用(Kaelin et al. 1991, Grlinick and Chao 1996),以及证实探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互作用。这两种实验的设计和实施都有所不同。
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