「考研实验题」第一题一般考查免疫共沉淀的原理，其次分析免疫共沉淀图上的一些信息代表什么。另外一类型主要考查实验设计，对要去寻找未知蛋白X，让你设计实验，也可通过免疫共沉淀实现。这个技术是考研和研究生学习最重要的一个技术。
1.实验原理：
免疫共沉淀（Co- Immunoprecipitation, Co-IP）是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法。其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的Protein A或G，若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白，就可以形成这样一种复合物：“兴趣蛋白—抗性蛋白抗体—Protein A或G—Agarose珠”，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。2.实验流程
以A和B蛋白内源性的Co-IP为例，具体操作步骤为：
1）提前预热好培养基，复苏液氮罐中的细胞，放置于37度培养箱中，扩培至IP实验所需细胞量；
2）当细胞密度接近于长满时，取冰盒备用，将培养板放置于冰盒上，利用细胞刮收蛋白，采取环刮方式，避免细胞损伤，移至1.5mL管，用移液枪吹吸几下将其打散（每个10cm盘为一管）；
3）上述细胞悬液于2300转速下离心3分钟，使细胞沉淀完全，弃掉上清；
4）每管加150μL含PMSF（1000X）和cocktail（1000X）的Triton（1X）裂解液，置于冰上裂解10分钟；
5）活化beads：将吸头尖端剪掉，用移液枪取40μLbeads至1.5mL管中（由于密度不均，加入之前要上下轻轻颠倒混匀beads），用Triton（1X）裂解液每次加1mL，颠倒20-30下左右，以2300转速离心1分钟，吸取上清液弃掉，该步骤重复洗三遍，向珠子中加入20μL裂解液，冰上放置，备用；
6）将以上细胞合为一管，每管以20%的功率超声六下，13000转下离心10分钟，吸取上清，弃掉沉淀物；
7）从上清中取75μL作为input作对照，加5X Loading buffer，95度煮10分钟，剩余蛋白加入7μL的beads，于4度旋转混合仪上孵育1小时；
8）取孵育完的蛋白，2300转下离心3分钟，取上清分别均分至两个新的EP管中（A和B），用裂解液分别将体积补至1mL，向EP管中各加入8μL的beads，A管中再加入Y蛋白的抗体3μg，B管中加入6μL浓度为1μg/μL的IgG，于四度旋转混合仪孵育3h左右；
9）再次洗三遍珠子（重复上面的步骤），小心吸取干净后加入40μL的Triton裂解液和10μL的5X Loading buffer，95度煮10分钟，放冰箱贮藏，或者直接跑胶，杂A的抗体。
1.实验原理：
免疫共沉淀（Co- Immunoprecipitation, Co-IP）是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法。其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的Protein A或G，若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白，就可以形成这样一种复合物：“兴趣蛋白—抗性蛋白抗体—Protein A或G—Agarose珠”，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。2.实验流程
以A和B蛋白内源性的Co-IP为例，具体操作步骤为：
1）提前预热好培养基，复苏液氮罐中的细胞，放置于37度培养箱中，扩培至IP实验所需细胞量；
2）当细胞密度接近于长满时，取冰盒备用，将培养板放置于冰盒上，利用细胞刮收蛋白，采取环刮方式，避免细胞损伤，移至1.5mL管，用移液枪吹吸几下将其打散（每个10cm盘为一管）；
3）上述细胞悬液于2300转速下离心3分钟，使细胞沉淀完全，弃掉上清；
4）每管加150μL含PMSF（1000X）和cocktail（1000X）的Triton（1X）裂解液，置于冰上裂解10分钟；
5）活化beads：将吸头尖端剪掉，用移液枪取40μLbeads至1.5mL管中（由于密度不均，加入之前要上下轻轻颠倒混匀beads），用Triton（1X）裂解液每次加1mL，颠倒20-30下左右，以2300转速离心1分钟，吸取上清液弃掉，该步骤重复洗三遍，向珠子中加入20μL裂解液，冰上放置，备用；
6）将以上细胞合为一管，每管以20%的功率超声六下，13000转下离心10分钟，吸取上清，弃掉沉淀物；
7）从上清中取75μL作为input作对照，加5X Loading buffer，95度煮10分钟，剩余蛋白加入7μL的beads，于4度旋转混合仪上孵育1小时；
8）取孵育完的蛋白，2300转下离心3分钟，取上清分别均分至两个新的EP管中（A和B），用裂解液分别将体积补至1mL，向EP管中各加入8μL的beads，A管中再加入Y蛋白的抗体3μg，B管中加入6μL浓度为1μg/μL的IgG，于四度旋转混合仪孵育3h左右；
9）再次洗三遍珠子（重复上面的步骤），小心吸取干净后加入40μL的Triton裂解液和10μL的5X Loading buffer，95度煮10分钟，放冰箱贮藏，或者直接跑胶，杂A的抗体。
