image J 分析wb灰度值

⭐️ 打开Image J 软件，菜单栏选择File→Open（或使用快捷键Ctrl+O）→ 弹出对话框→选择目标文件夹→文件夹内找到WB条带图。
⭐️ 菜单栏选择Image→Type→8-bit，转化灰度图。
⭐️ Process→Subtract Background，去除背景影响。
⭐️ Rolling ball radius默认是50，在Light background选项进行勾选。
⭐️ 菜单栏选择Analyze→Set Measurements，在这里设置测量参数。
⭐️ 将需要分析的结果项勾选上，点击OK。
Area（区域）
Mean gray value（平均灰度值）
Min & max gray value（最小和最大灰度值）
Integrated density（集成密度
⭐️ 菜单栏选择Analyze→Set Scale，设置单位
⭐️Unit of length→【Pixels】，长度单位选择像素，之后点击OK。
⭐️ 菜单栏选择Edit → Invert，转换亮度，转为亮带。
⭐️ 在如下图所示的工具栏，选择区域选择工具，选中分析的单个条带。
⭐️ 菜单栏选择Anlyze→Measure，开始逐个分析。
⭐️ 所有结果分析，当测定完所有条带后，点击Results—File—Save as，导出Excel表格；也可选择Result中的“Edit”中的“Select All”,复制数据“IntDen”到Excel表格中进行分析；
🌎均一化处理：对应研究基因和内参的IntDen，以研究基因/内参基因。在Excel表格中将目的蛋白灰度值除以内参蛋白的灰度值，进行归一化处理。