一、实验操作流程
1. 细胞培育环节
• 接种：实验初始，选取六孔板作为培养容器，每孔接种约1000个细胞，并设立2-3组平行对照，以确保数据的可靠性。每隔三日更换新鲜培养液，并持续监测细胞状态。
• 密度控制：保持细胞密度适中是成功的关键，需确保细胞在培养板上均匀分布，低倍镜下观察，每个视野内细胞数量建议维持在1-3个，以促进单个克隆的形成。
•培养周期：经过大约两周的培养，细胞群落将逐渐汇聚，每个群落包含约50个细胞，并展现出细胞间的挤压与迁移特性。此时，需密切关注细胞动态，一旦最密集区域出现显著变化，即应考虑终止培养。
2. 固定与着色
• 固定步骤：首先移除培养基，用PBS溶液清洗一次后，依次使用4%多聚甲醛、40%甲醛及纯甲醇进行固定，每孔固定时间约15-30分钟，以确保细胞形态的稳定。
• 染色处理：随后弃去固定液，再次以PBS清洗，接着加入1X吉姆萨染液，每孔染色10-30分钟（通常每孔1毫升），使细胞结构清晰可见。
• 后续处理：染色完成后，彻底清洗培养板，晾干样本，随后进行图像采集与细胞计数分析。
二、操作要点
1. 克隆增殖实验是评估细胞增殖潜能及探究药物或基因对细胞生长影响的重要手段，涵盖从细胞接种到克隆计数的一系列精细步骤。
2. 接种时的细胞密度控制尤为重要，过高的密度会导致克隆相互融合，影响实验结果的精确性。因此，务必在低倍镜下确认每个视野内细胞数量适宜，以1-3个细胞为最佳。
3. 在拍照记录时，采用透光均匀的透写台作为背景，能显著提升图像清晰度。同时，将手机相机调至约3倍放大，可有效避免镜头畸变，确保拍摄到的克隆形态真实、不变形，从而为后续的数据分析提供准确依据。
1. 细胞培育环节
• 接种：实验初始，选取六孔板作为培养容器，每孔接种约1000个细胞，并设立2-3组平行对照，以确保数据的可靠性。每隔三日更换新鲜培养液，并持续监测细胞状态。
• 密度控制：保持细胞密度适中是成功的关键，需确保细胞在培养板上均匀分布，低倍镜下观察，每个视野内细胞数量建议维持在1-3个，以促进单个克隆的形成。
•培养周期：经过大约两周的培养，细胞群落将逐渐汇聚，每个群落包含约50个细胞，并展现出细胞间的挤压与迁移特性。此时，需密切关注细胞动态，一旦最密集区域出现显著变化，即应考虑终止培养。
2. 固定与着色
• 固定步骤：首先移除培养基，用PBS溶液清洗一次后，依次使用4%多聚甲醛、40%甲醛及纯甲醇进行固定，每孔固定时间约15-30分钟，以确保细胞形态的稳定。
• 染色处理：随后弃去固定液，再次以PBS清洗，接着加入1X吉姆萨染液，每孔染色10-30分钟（通常每孔1毫升），使细胞结构清晰可见。
• 后续处理：染色完成后，彻底清洗培养板，晾干样本，随后进行图像采集与细胞计数分析。
二、操作要点
1. 克隆增殖实验是评估细胞增殖潜能及探究药物或基因对细胞生长影响的重要手段，涵盖从细胞接种到克隆计数的一系列精细步骤。
2. 接种时的细胞密度控制尤为重要，过高的密度会导致克隆相互融合，影响实验结果的精确性。因此，务必在低倍镜下确认每个视野内细胞数量适宜，以1-3个细胞为最佳。
3. 在拍照记录时，采用透光均匀的透写台作为背景，能显著提升图像清晰度。同时，将手机相机调至约3倍放大，可有效避免镜头畸变，确保拍摄到的克隆形态真实、不变形，从而为后续的数据分析提供准确依据。
