UBE2C通过阻断SNAT2与NEDD4L相互作用

UBE2C通过阻断SNAT2与NEDD4L相互作用，促进SNAT2 K59残基上的单泛素化，从而阻止K63连接的K33多泛
素化。

图1
第一步，确定SNAT2单泛素化和多泛素化位点
MS泛素化分析表明，UBE2C过表达升高SNAT2 59位点赖氨酸泛素化，而降低其33位点赖氨酸泛素化（图2a）。构建SNAT2 K59R和SNAT2 K33R突变体进行Co-IP分析，发现SNAT2 K59R显著抑制了UBE2C介导的SNAT2单泛素化（图2b），表明SNAT2在K59残基上被单泛素化；SNAT2 K33R突变阻断了K63连锁的多泛素化（图2c），表明SNAT2在K33残基上被多泛素化。表明UBE2C促进了K59残基上的SNAT2单泛素化，而抑制了K63连接的K33残基上的多泛素化。
第二步，确定UBE2C通过调节SNAT2和NEDD4L之间的相互作用来抑制K63连接的 SNAT2多泛素化
先前有研究报道nedd4样E3泛素蛋白连接酶(NEDD4L)促进了K63连接的SNAT2多泛素化。Co-IP分析也证实NEDD4L与SNAT2相互作用（图2d）。此外，Co-IP实验发现，NEDD4L的敲低消除了UBE2C沉默促进K63连接的SNAT2多泛素化的能力（图2e），而不影响SNAT2的单泛素化（图2f）。另外，过表达UBE2C阻断了SNAT2和NEDD4L的相互作用，而不影响NEDD4L的表达（图2g）。Co-IP实验还发现SNAT2 K59R突变体与NE
DD4L之间的相互作用显著减弱（图2h），表明K59位点对SNAT2与NEDD4L之间的相互作用至关重要。
表明UBE2C通过阻断SNAT2和NEDD4L之间的相互作用，促进K59残基上的SNAT2单泛素化，从而阻止k63连接
的K33多泛素化。

图2
如有泛素化修饰机制研究相关科研问题，欢迎留言探讨。