荧光素酶报告基因（Luc）系统，依托荧光素为底物，巧妙检测萤火虫荧光素酶活性。此酶能催化荧光素氧化为oxyluciferin，过程中释放生物荧光，成为研究热点。 荧光素酶家族庞大，能催化多样底物发光，而哺乳细胞却无此内源酶。其中，细菌荧光素酶因热敏性在哺乳细胞研究中受限；萤火虫荧光素酶则凭借高灵敏度、宽检测范围（7-8个数量级），成为哺乳细胞研究的首选，尤其适合高通量筛选。更值得一提的是，新型萤火虫荧光素酶无需细胞裂解即

ELISA（酶联免疫吸附测定）实验常见标本的采集处理及保存方法对于确保实验结果的准确性和可靠性至关重要。以下是对血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织匀浆液以及尿液、唾液等其他液体生物样本的采集处理及保存方法的详细介绍。 PART 01样本的收集与处理01血清 • 收集：使用无热原、无内毒素的试管或离心管采集静脉血。 • 处理：将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。随后，在4℃条件下以1000×g离心20分钟，仔细收

在科学实验领域，小鼠无疑是科研人员不可或缺的“得力助手”，但其饲养管理却颇为复杂，任何突如其来的疾病或死亡都可能对实验结果造成显著影响。鉴于小鼠的自我调节与疾病抵抗能力相对较弱，掌握恰当的饲养方法对于科研人员而言至关重要。 1、生活环境调控 小鼠对温度有着严格的适应范围，其耐受极限为低温10℃至高温37℃，而最适宜的温度区间则为30～33℃。为了确保小鼠的健康，饲养环境需维持以下标准：温度应控制在18～29℃之间，相

自主荧光，指的是在组织或细胞样本进行荧光检测时，所产生的与目标信号无关的背景荧光信号。 解决自主荧光问题主要有两种途径：一是选用冰冻切片进行染色，二是减弱石蜡切片染色中的自主荧光。 本文将重点探讨：如何降低免疫荧光染色实验中石蜡切片的自主荧光。 一、石蜡切片的特性 01 石蜡切片厚度可达3微米，实验过程中组织损耗较小 在利用普通小鼠、基因敲除小鼠等小型动物进行实验时，我们经常需对同一组织进行病理学及分子生物学

在细胞培养环节，血清确保了细胞的顺利生长与分裂。血清内富含各类蛋白质、氨基酸、激素等必需成分，部分成分是细胞自身无法合成的。此外，血清还蕴含众多未知的细胞生长因子、附着促进因子及其他活性物质，这些都有助于细胞的生长、分裂和附着，并具备抗胰酶特性。在细胞培养中，牛血清与马血清最为常用，其中小牛血清、胎牛血清和新生牛血清的应用尤为广泛。 为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀？如何处理？ 血清中出现絮状沉淀的

自主荧光，指的是在组织或细胞样本进行荧光检测时，所产生的与目标信号无关的背景荧光信号。 解决自主荧光问题主要有两种途径：一是选用冰冻切片进行染色，二是减弱石蜡切片染色中的自主荧光。 本文将重点探讨：如何降低免疫荧光染色实验中石蜡切片的自主荧光。 一、石蜡切片的特性 01 石蜡切片厚度可达3微米，实验过程中组织损耗较小 在利用普通小鼠、基因敲除小鼠等小型动物进行实验时，我们经常需对同一组织进行病理学及分子生物学

这部分的写作需注意以下几方面： 一）要介绍国外动态，更要介绍国内研究情况 很多人写文章喜欢引用外国人的文献，而不注意国内同行的工作，标书写作中也经常出现类似问题。如此以来，容易使评审专家认为申请人对国内研究情况不了解，最终以“不了解国内情况”为由，不同意资助。 二）国内情况应包括申请人自己的研究工作 有的申请人只介绍别人的工作，却忽视了对自己的工作的介绍。有人认为后边的研究基础中会介绍自己的工作，这里

培养液是通过人工方式，将微生物所需的各种养分混合而成的营养环境，它为微生物的繁衍提供了必要的营养和生存条件。 消毒与灭菌的方法，大体上可以分为四大类别： 1. 热力消毒：涵盖直接火焰消毒、干热消毒、高压蒸汽消毒、分段消毒以及沸水消毒； 2. 过滤除菌； 3. 辐射消毒与灭菌； 4. 化学消毒剂消毒与灭菌。 本实验将介绍培养液与玻璃器具消毒中部分常用的消毒方法。 1. 干热消毒法（热空气消毒） 干热消毒通常利用电热烘箱作为消毒设

流式细胞术 (Flow Cytometry, FCM) 是一种在液流中快速检测细胞特性的技术。它通过将单个细胞与特异性抗体结合，对细胞进行多参数定量分析，包括细胞表面标记、细胞内蛋白质表达、细胞周期、DNA含量等。流式细胞术具有高通量、高灵敏度、高特异性等优点，广泛应用于免疫学、血液学、肿瘤学等领域。 流式细胞术的工作原理 在流式细胞仪中，细胞被包裹在鞘液 (sheath) 中，通过喷嘴以一定的速度射出。当细胞依次通过激光束时，激光束会照射到细胞

在免疫组化的石蜡包埋法制片过程中，甲醛固定处理会导致相邻蛋白质间形成亚甲基桥结构，这种结构会阻止抗体与抗原表位的特异性结合，产生抗原掩蔽效应，导致某些抗原染色效果不佳甚至无法染色。为了逆转这种效应，需要进行抗原修复处理。 热诱导抗原修复法 01实验原理 热诱导抗原修复法通过在一定温度的抗原修复液中对组织切片进行适当时间的加热处理，使蛋白质处于水相环境中，加热加速蛋白水解过程，从而打开因固定交联而形成的化

一、污染防控措施 在执行PCR操作时，操作人员需严格遵循既定规程，以最大化减少乃至消除PCR过程中的污染风险。 01 操作区域划分： 尽管当前常规PCR操作难以实现全程单人单管的完全封闭作业，但无论条件如何，均须确保实验在三个独立区域内分阶段完成，且PCR的前处理与后处理需严格隔离： 样本制备区：专用于扩增模板的准备工作； PCR扩增区：涵盖反应体系的配制及PCR扩增过程； 产物分析区：负责凝胶电泳分析、产物成像及重组克隆的操作。

在进行免疫荧光实验时，常见的问题包括：背景漆黑、光点散乱、高背景染色及模糊，目标蛋白荧光微弱且组间差异不显著，以及荧光过强导致的非特异性标记。其实针对这些问题解决起来并不难，我们可以从以下几个方面着手优化： 一、优化灌流取材 拍摄时发现的血管状非特异性染色，往往源于灌流不彻底，动物体内血液残留。以小鼠心脏灌流为例，应先用预冷1×PBS彻底灌流至血液排尽，再灌注4%多聚甲醛溶液至小鼠僵直。随后，将组织置于4℃的4

一、细胞增殖与细胞周期 细胞增殖是生物体生长和组织修复的关键机制，涉及细胞周期的不同阶段，包括G1期（DNA合成前期）、S期（DNA复制期）、G2期（DNA合成后期）和M期（有丝分裂期）。细胞周期的精确调控对于维持生命和正常生物体功能至关重要。 二、Cyclin蛋白家族概述 Cyclin是一类能够周期性地表达和降解的蛋白质，通过与周期蛋白依赖性激酶（CDKs）组成复合物，在细胞周期的不同阶段起着关键的调控作用。Cyclin蛋白家族包含多个不同亚型的

单平台睡眠剥夺方法： 单平台睡眠剥夺方法最早由Jouvet等开发并用于猫的REM睡眠剥夺，后续经过Cohen等的修改用于剥夺大鼠的REM睡眠。该方法将一个狭窄平台（直径6.5cm）放置在长40.0cm×宽34.0cm×高16.0cm的水槽中，往水槽中加水至平台下1.0cm。将1只大鼠置于狭窄平台上，当进入REM睡眠阶段时，动物会失去肌肉张力并接触水，从而觉醒。对照组通常是笼养对照动物或在完全相同的环境条件下将大鼠放置在宽平台上（直径14.0cm）。这种方法因为使动物受到了

全自动步态分析系统在实验动物研究中具有重要的应用价值，尤其是在神经科学、药理学、遗传学以及生物医学工程等领域。使用全自动步态分析系统时，通常需要将动物放置在一个特制的通道内自由行走，系统会记录下它们的步伐长度、宽度、速度、足底压力分布等多个参数。通过对这些定量的步态数据的分析，研究人员可以获得关于实验动物运动协调性、平衡能力和肌肉力量等方面的信息，帮助研究人员评估实验处理（如疾病模型建立、药物干预

旁观揣摩、网络搜索、屡做屡错。 是大部分同学学习实验的真实写照。 为什么会这样？ 因为，大部分实验室没有专门的课程或资料来帮助新生学习实验知识。 所以，大家只能靠看、靠搜、靠猜。 这种学习方法，效率低、学来的方法是对是错也是一个疑问。 而且，师兄师姐好不容易搞清楚的实验细节和注意事项，却随着他们的毕业，方法也随之“失传”。 实验知识的沉淀，非常困难，同样的问题可能每一届都会出现。 所以，系统的实验知识学习体

qPCR实验中通常会遇到复孔间重复性差的情况，一般有以下两种： 一、CT值很大，如CT≥30，重复性差属于正常现象。该现象符合泊松分布，即在有效模板量很少的情况下，模板与引物的碰撞存在随机性，直接导致复孔间的CT值差异较大。解决方法为如果融解曲线没有杂峰，无模板阴性对照同目的基因的△CT值为3 or 5以上，那CT值为准确的，可多设置几个复孔，选择重复性好的CT值参与计算。 二、CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。可从以下几

实验室有用于培养细胞的超净台，内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下，目的是消毒，减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度，因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多，又如何达到消毒的目的呢？在网上搜索后找到一些资料，认为不应在超净台内使用火焰。那么超净台和安全柜内到底应不应该有酒精灯。 超净台正方观点： 支持方理由如下：无菌是分等级的，超净工作台一般可以达到局部

1. 上样：样品加载： 上样量：细胞：10ug，组织：20ug，标记物上样量：2ul。 2. 电泳：分离胶浓度：常见有10%、9%和6%（大分子量选用浓度较低的胶，小分子量则相反）。浓缩胶浓度：5%。 电泳缓冲液配制：将100ml母液加入900ml蒸馏水，再加入1g SDS。 电泳条件：运行浓缩胶条件为80v，40min；运行分离胶条件为120v，50min。 3. 转膜：电转液：100ml母液+700ml蒸馏水+200ml甲醇（1）将PVDF膜在100%甲醇中浸泡10秒至15秒。 （2）倒入配置好的转印缓冲液于平底托盘中，将

1. 蛋白类型 确定你的蛋白是什么类型，蛋白类型决定你要使用的表达系统。 胞质蛋白——大肠杆菌系统 分泌蛋白——酵母表达系统（因为大肠杆菌系统缺乏翻译后修饰功能) 膜蛋白——杆状病毒或酵母表达系统 2. 酶切位点 分析目的蛋白DNA序列的酶切位点，使用T4连接酶的方式构建载体时，不要使用目的蛋白DNA序列包含的酶切位点，以防将目的蛋白的DNA序列切断。 3. 稀有密码子 定义：遗传密码子有64种，但是绝大多数生物使用密码子具有偏好性，倾