不定期更新

部分试剂

第一步，我们先来合成Fmoc氨基酸

一般来说，氨基酸是用Fmoc来保护α-NH2基团的，可以用Fmoc-Cl或Fmoc-OSu，在Na2CO3或NaHCO3存在下与氨基酸在H2O或二氧六环中反应得到，用非极性溶剂（如Et2O，EtOAc等）萃取后，加石油醚析出结晶，得产物。含活泼侧链的氨基酸则一般在Fmoc的基础上，针对侧链的性质进行保护。

本次合成采用二异丙基碳二亚胺进行氨基酸的缩合反应，舍弃了传统利用DCC进行的缩合反应，避免了DCC水合后产生二环己基脲而难以分离的弊端，并且利用二异丙基碳二亚胺可以达到与DCC一样的效果。

绿色荧光蛋白应为黄色结晶，可以使用硫酸铵进行盐析，也可以用TFA/CS2常温蒸发，考虑到后者毒性，本实验采用盐析法提纯。

图为理想合成装置

GFP的氨基酸序列如下：MSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTFSYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYK

又是试剂。。。其中，石油醚与乙酸乙酯用于Fmoc保护氨基酸的萃取与分离，DCM则用于多肽固相合成中的步骤。

①注意：石油醚极易燃，对人体有害，使用完毕后应安全处理；
②注意：DCM是一个卤代烃，应避免与身体接触，DCM沸点仅39.8℃，应避免高温。

本次合成按顺序分为3大步骤：1.氨基酸的保护（主链氨基保护、侧链保护）；2.固相载体(羧基磁性纳米聚苯乙烯微球)的合成；3.GFP固相合成（连接固相载体与氨基酸，脱保护、延长肽链，脱保护、水解固相载体与GFP之间的酯键，柱层析，结晶）

emmmm这几天在外游玩，回来后会持续更新，第一个实验是制备Fmoc-L-亮氨酸